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希爾博士關于外泌體保存的常見問題的解答
點擊次數:1859 發布日期:2019-12-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

希爾博士在接受外泌體NTA檢測的技術咨詢時,經?;岜晃實?strong>外泌體保存相關的問題。

譬如:

→我的外泌體已經在4度放了一周,還能做檢測嗎?

→我是1個月前提取的外泌體,一直放在-80度冰箱,還能做粒徑檢測嗎?

→我的樣本放在-80度冰箱兩個月了,還能提取外泌體做檢測嗎?

→我在沈陽,寄樣本去上海做檢測,可以用冰袋寄送嗎?

諸如此類………


目前并沒有定論來回答以上問題,

我們應該去文獻中尋找可參考的信息,

抑或——最科學的方式——自行做對照實驗去探究。

Example 1​
數據來源:Influence of Storage Condition on Exosome Recovery , DOI: 10.1007/s12257-015-0781-x  
實驗目的:探究不同溫度下長時間保存對外泌體樣本的影響
實驗方法:對HEK 293的細胞培養上清提取分離外泌體,將外泌體樣本分成4組,分別保存在-70℃、-20℃、4℃和室溫下10天后,進行Western Blot檢測,選擇的marker為HSP70、CD63、CD9。
實驗結果:結果顯示,在-20℃和-70℃下保存的外泌體比較完整無損,而4℃和室溫下CD63已基本沒有表達,室溫保存條件下HSP70的表達量也有所降低。


相較于4℃、-70℃和新鮮樣本,室溫存放的外泌體蛋白和RNA濃度的降低程度較明顯。

本例說明,-20℃或更低溫度是比較可取的外泌體長期存儲條件。

Example 2
數據來源:Effects of storage temperature on airway exosome integrity for diagnostic and functional analyses ,DOI: 10.1080/20013078.2017.1359478
實驗目的:探究不同溫度下保存對外泌體樣本的影響
實驗方法:提取分離小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的外泌體,將外泌體樣本分為三組——新鮮提取組和分別保存在-80℃、4℃ 4天的兩組,通過DLS、TEM和zeta電位觀察外泌體的變化。
實驗結果:結果顯示,相較于新鮮提取的外泌體樣本,低溫儲存4天的樣本粒徑有一定程度的增大,電位數值降低,顆粒有團聚傾向;從TEM圖片看,-80℃保存的外泌體有多層結構產生。


另外,該實驗也通過無標記的LC-MS/MS評估了外泌體蛋白質含量,結果表明低溫儲存一定時間都會引發蛋白質泄露。所以,不論是從外泌體結構還是蛋白質含量角度出發,最好是在分離后立即進行各項實驗。

Example 3​
數據來源:Handling and storage of human body fluids for analysis of extracellular vesicles, DOI: 10.3402/jev.v4.29260
實驗目的:探究單次凍融和不同時間、溫度儲存對血漿EVs的影響
實驗方法:血漿在新鮮狀態和分別在-20℃、-80℃、-196℃儲存6個月和1年后被檢測,通過RPS、NTA和FCM觀察粒徑和濃度的變化。
實驗結果:圖a-d的RPS和NTA結果說明不同溫度下儲存6個月和1年對樣本濃度和粒徑影響不明顯,CD235a和CD61的表達量也沒有太大差異,只有lactadherin的表達相對于新鮮樣本升高了約7倍(圖e)。綜上說明,該研究中用到的血漿樣本在不同溫度下(低溫)儲存,即便長達1年,也能保持一定的穩定性。
同篇文章對唾液和尿液樣本也做了類似研究,得到相近結果。


白色:新鮮血漿;灰色:血漿凍存6個月;黑色:血漿凍存1年

也有研究團隊對不同儲存條件對外泌體中miRNA穩定性做評估:miRNA in Plasma Exosome is Stable under Different Storage Conditions (doi:10.3390/molecules19021568)。

從這幾個例子來看,不同時間、溫度的保存對不同的外泌體樣本影響不一;如果研究方向為外泌體形態特征、蛋白或其他功能性分析,在分離后新鮮使用為最佳。目前主流的建議是提取出外泌體后最好是新鮮使用,或低溫短期保存。

而到底低溫保存一定時間后是否對外泌體有什么影響,希爾博士認為還是因樣本而異,實在糾結的話,還是做對比實驗,用實際數據說話!

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來源:上海逍鵬生物科技有限公司
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標簽: 外泌體
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